Kỹ thuật real time PCR và ứng dụng trong chẩn đoán bệnh thú y

  • 26/11/2019
  • Thời gian đăng: 17:44:21
  • 0 bình luận

Kỹ thuật Real time PCR được sử dụng trong phòng thí nghiệm dựa trên phản ứng tổng hợp chuỗi, đây là kỹ thuật được sử dụng nhằm khuếch đại và cùng lúc xác định được số lượng phân tử DNA. Bài viết này HappyVet sẽ cùng bạn đọc đi tìm hiểu tổng quan về Real time PCR.

Real Time PCR là gì?

Kỹ thuật Real time PCR là phương pháp khuếch đại gen và đọc kết quả được hực hiện đồng thời trong cùng một ống hay một giếng mẫu.

Khác với phản ứng PCR truyền thống, Real time PCR có khả năng phân tích kết quả mà không cần qua bước điện di trên gel. Kết quả phân tích sẽ được thông qua tín hiệu huỳnh quang phát sáng ra theo thời gian tại mỗi chu kỳ của phản ứng.

Giải đáp xét nghiệm pcr là gì?

Giải đáp xét nghiệm pcr là gì?

Thành phần máy Real Time PCR

Trong kỹ thuật Real time PCR, để chạy được cần đến các thành phần sau:

  • Máy luân nhiệt
  • Máy quang phổ huỳnh quang
  • Máy vi tính theo dõi và phân tích kết quả

Thiết bị PCR trong phòng thí nghiệm

Thiết bị PCR trong phòng thí nghiệm

Quy trình xét nghiệm PCR

Đoạn mồi có chiều dài tốt nhất từ 20 - 40 nucleotide với nhiệt độ biến tính khoảng từ 60 - 75 °C. Quy trình xét nghiệm PCR được thực hiện gồm 20 - 30 chu kỳ, mỗi chu kỳ gồm 3 bước như sau:

  • Bước biến tính: Nhiệt độ tăng lên 94 - 96°C để tách hai sợi DNA ra, nó phá vỡ cầu nối hydrogen giữa hai sợi DNA. Trước chu kỳ 1, DNA thường được biến tính đến khi mở chuỗi để đảm bảo mẫu DNA và đoạn mồi sẽ được phân tách hoàn toàn thành dạng sợi đơn. Thời gian từ 1 - 2 phút.
  • Bước gắn mồi: Sau khi hai sợi DNA tách ra, lúc này nhiệt độ được hạ thấp xuống để mồi có thể gắn vào sợi DNA đơn. Nhiệt độ lúc này phụ thuộc vào đoạn mồi và thường nhỏ hơn nhiệt độ biến tính 50 °C (45-60 °C). Việc sử dụng sai nhiệt độ trong giai đoạn này sẽ dẫn đến việc đoạn mồi không gắn hoàn toàn vào DNA mẫu. Thời gian từ 1 - 2 phút.
  • Bước kéo dài: Cuối cùng, DNA polymerase sẽ gắn vào sợi trống và nó bắt đầu bám vào và hoạt động dọc theo sợi DNA. Nhiệt độ và thời gian kéo dài phụ thuộc DNA-polymerase và chiều dài mảnh DNA cần khuếch đại.

Ứng dụng kỹ thuật Real time PCR

Kỹ thuật được ứng dụng phổ biến trong chẩn đoán và nghiên cứu cơ bản. Trong công nghiệp, xét nghiệm PCR được ứng dụng các vi sinh vật có trong thức ăn và rau, hoặc cũng được dùng để xác định các sinh vật biến đổi gen và định lượng xác định kiểu gen các virus gây bệnh ở người. 

1. Ứng dụng trong chẩn đoán bệnh ở thú y, thủy sản

Hiện nay, kỹ thuật Real time PCR được ứng dụng rộng rãi trong chẩn đoán bệnh do vi khuẩn, virus gây ra trong thú y, thủy sản,... Chúng được sử dụng tại các cơ quan thú y của nhà nước để chẩn đoán và phát hiện sớm bệnh, phục vụ nhu cầu kiểm soát dịch bệnh của các doanh nghiệm và trang trại chăn nuôi.

Việc chẩn đoán bệnh thú y dựa trên xét nghiệm PCR cần phải được thực hiện kèm theo với bộ KIT (bộ hóa chất phản ứng) được thiết kế phù hợp với từng loại virus, vi khuẩn gây bệnh trên chó, mèo, gia cầm, lợn,.... Với nhiều năm kinh nghiệm trên thị trường, hãng GeneReach đã phát triển bộ Kit trên rất nhiều bệnh khác nhau có thể chạy trên máy POCKIT và chạy trên hệ thống chẩn đoán bệnh dựa trên kỹ thuật Realtime PCR cho phép phát hiện nhanh và chính xác với tác nhân gây bệnh. 

Kit Real Time PCR chẩn đoán bệnh thú ý

Kit Real Time PCR chẩn đoán bệnh thú ý

Xem thông tin chi tiết sản phẩm => TẠI ĐÂY

2. Ứng dụng trong vi sinh vật học

Phản ứng PCR được sử dụng bởi các nhà vi sinh vật học làm việc trong lĩnh vực a toàn thực phẩm, hư hỏng thực phẩm và lên men. Ngoài ra, kỹ thuật real time PCR cũng được sử dụng với mục đích giảm nguy cơ nhiễm khuẩn của nguồn nước cũng như bảo vệ sức khỏe của cộng đồng. 

3. Ứng dụng trong nghiên cứu

Kỹ thuật real time PCR cũng được ứng dụng trong nghiên cứu với mục đích định lượng số bản phiên mã của gen. Phương pháp này có thể phát hiện sự biến đổi trong biểu hiện của một gen qua thời gian. Ngoài ra, kỹ thuật này cũng được sử dụng để xác định sự đồng nhất giữa các alen ở động vật biến đổi gen sử dụng trong nghiên cứu.

4. Ứng dụng chẩn đoán tác nhân gây bệnh ở thực vật

Có nhiều hệ thống đã được phát triển và đưa vào trong công tác chẩn đoán tác nhân gây bệnh ở thực vật, cho phép phát hiện chỉ một lượng nhỏ DNA của Phytophthora ramorum - Đây là một loại nấm có khả năng giết chết Oaks và một số loài khác. 

Ngoài ra, kỹ thuật Real time PCR còn được ứng dụng trong việc xác định các sinh vật biến đổi gen, định lượng lâm sàng và kiểm tra kiểu gen.

Hiện tại, các loại kit real time PCR ứng dụng trong chẩn đoán bệnh thú y đang được HappyVet cung cấp ra thị trường với mức giá hợp lý. Quý khách hàng quan tâm liên hệ ngay HOTLINE 0983.600.953 để được hỗ trợ trực tiếp từ chuyên viên tư vấn. 

Thực hiện - Quàng Văn Dũng

Tìm kiếm liên quan:

- Xét nghiệm hpv-pcr là gì

- Xét nghiệm pcr lao

- Tài liệu kỹ thuật pcr

- Đoạn mồi là gì

- Tổng hợp adn

- Tái bản adn

- Taq polymerase là gì

- Đoạn nhiệt

Bình luận, Hỏi đáp

0983 600 953 khoa-hoc-xuat-nhap-khau-tphcm